現(xiàn)代色譜技術在中藥復方研究中的應用進展

　　【摘要】  本文闡述了液相色譜技術、高速逆流色譜技術、紅外光譜技術、色譜-質譜聯(lián)用技術、色譜指紋圖譜、氣相色譜法、薄層層析及薄層掃描法、超臨界流體萃取-超臨界流體色譜法等八種技術在中藥復方中的應用狀況，并且提出了較有價值的未來發(fā)展建議及規(guī)劃。

　　【關鍵詞】  色譜；中藥復方；應用進展

　　中藥是一個非常復雜的體系，中藥復方提取物是一個較復雜的混合物。為提高中藥質量，改變傳統(tǒng)中藥劑型“大、黑、粗”的狀態(tài)，讓中藥步入市場，一些現(xiàn)代高新工程技術正被不斷地運用到中藥生產中，使中藥生產不但更加符合傳統(tǒng)的中醫(yī)藥理論，也更加確保了中藥復方制劑的質量，還提高了現(xiàn)有中草藥資源的利用率。

　　中藥復方制劑現(xiàn)代化是目前我國醫(yī)藥科研人員和產業(yè)化所面臨的重大任務。中藥復方制劑現(xiàn)代化過程中一項很重要的任務就是利用現(xiàn)代醫(yī)學、化學、藥學、計算機信息學等各項現(xiàn)代自然科學的方法和技術，從微觀分子水平認識和發(fā)展中醫(yī)藥理論，研制出現(xiàn)代中藥復方新藥。

　　隨著科學技術的高速發(fā)展，越來越多的高新技術將會運用到中藥復方制劑有效成分的研究上。這些高新技術具有傳統(tǒng)方法*的優(yōu)點，對提高中藥制劑質量、減少服用劑量、提高生產效率、降低環(huán)境污染等方面起到積極的推動作用。本文對八種高新技術在中藥復方研究中的應用進展作了簡要綜述。

　　1  液相色譜技術

　　1.1  中藥復方制劑質量測檢方面的應用［1］  中藥復方制劑質量控制和質量標準的制定勢在必行，但由于中藥復方制劑成分的復雜性，給這方面的工作造成很大困難。HPLC技術在這方面有很大優(yōu)勢，甘草復方制劑質量評價常以甘草酸作為指標。用RP-HPLC以淺性回歸法測定甘草酸的結果表明其含量隨產地、藥材粗細、質地、斷面顏色的不同而異，斷面越黃，質地硬脆，折斷性大者甘草酸含量高，為評價甘草復方制劑品質提供了科學依據(jù)。

　　1.2  中藥配伍中的應用［1］  中藥湯劑多為復方，每種生藥又含有多種化學成分。臨床共煎過程中可能產生揮發(fā)、分解、助溶、吸附、水解、取代、中和、沉淀等一系列十分復雜的化學物理變化，這些變化直接影響到制劑的療效和毒副作用。用反相液相色譜法測定川芎單煎劑，川芎、丹參合煎劑，川芎、當歸合煎劑及改味四物湯中阿魏酸的含量時發(fā)現(xiàn)各組湯劑中阿魏酸的含量差異有統(tǒng)計學意義，配伍熟地對阿魏酸的溶出具有助溶作用。

　　2  高速逆流色譜技術［2］

　　高速逆流色譜（high-speed countercurrent chromatography，簡稱HSCCC）技術是一種不用任何固態(tài)載體或支撐體的液液分配色譜技術，分離效率高，產品純度高，不存在載體對樣品的吸附和沾染，具有制備量大和溶劑消耗少等優(yōu)點。至20世紀70年代末期，美國FDA和世界衛(wèi)生組織（WHO）開始利用此項技術作為分離抗生素成分進行檢定。目前，已開發(fā)出生產型、分析型兩大類高速逆流色譜儀，分別用于中草藥復方制劑成分的分離制備和定量分析。進樣量可從毫克級到克級，進樣體積可從數(shù)毫升到幾百毫升，不僅適用于非極性化合物的分離也適用于極性化合物的分離，還可用于中藥粗提取物中各組分的分離，也可用于進一步精制。1994年HSCCC技術得到進一步發(fā)展，其進樣量大大增加，能方便快速地分離克量級樣品，更有利于中藥復方制劑的分離制備。該技術有望成為中藥有效成分質量標準研究、分析的一種新方法，也將成為中藥生產的一種新型分離技術。

　　3  紅外光譜技術［3］

　　紅外光譜快速檢測中藥復方制劑時分三級鑒定，即對于差異較大的（如不同種類、不同炮制品等）中藥復方，僅需一般紅外光譜圖就可以做出判定，稱其為一級鑒定；差異性較小的（如不同產地、不同年限等）中藥復方可采用紅外光譜圖和二階導數(shù)譜圖相結合的方法對其并作出判定，此稱為二級鑒定；當紅外光譜圖和二階導數(shù)譜圖差異較小時，則可憑借二維相關紅外光譜加以判定，此為三級鑒定。這三級鑒定也是相互支持、相互佐證的，這樣下來可以基本鎖定中藥復方制劑的“全貌”——便于鑒定其真?zhèn)巍?yōu)劣及炮制差異等。

　　樣品的無損處理指既不破壞單味中藥的整體性（四氣五味、升降沉浮、性味歸經等的整體統(tǒng)一），又不破壞方劑配伍性（君臣佐使、相須相使等的整體統(tǒng)一）。在中藥復方制劑現(xiàn)代化的進程中，利用紅外光譜技術快速、有效、易行可控、產業(yè)化程度高的檢測能力，可為生產過程的在線、現(xiàn)時檢測和藥檢部門建立快速質檢反應機制提供了新的手段，對企業(yè)生產的在線監(jiān)控和藥材市場質量監(jiān)控有重要意義。

　　4  色譜-質譜聯(lián)用技術

　　4.1  色譜-質譜聯(lián)用技術應用［4］  色譜和質譜的聯(lián)用是目前zui受重視的手段。應用毛細管氣相色譜不僅能進行上百個成分的分離，同時還能對其進行質譜測定。目前，利用標準質譜庫再加以匹配、識別和定性已很普遍，但色譜-質譜聯(lián)用必須注意解決好來自于色譜和質譜兩方面的問題，主要包括液相色譜液體流動相的去除，質譜靈敏度、穩(wěn)定性的提高和質譜體積、成本的降低。去除液相流動相的zui常用方法是將其揮發(fā)去除，因此當液相色譜流動相含水量較高、含有緩沖鹽和流速較高時，液相色譜與質譜聯(lián)用技術的接口就變成技術的關鍵。目前，zui廣泛使用的接口類型：zui初電噴霧設計、加熱金屬毛細管、Turbo離子噴霧、Z型噴霧、正交噴霧、AQa等。

　　目前，將四極桿質譜與飛行時間質譜組成串聯(lián)質譜，結合發(fā)展的毛細管液相色譜技術組成的CapLC-Q-Tof-MS-MS，將集成毛細管液相色譜、四級質譜與飛行時間質譜的優(yōu)點成為當前解決中藥復方制劑樣品分離分析的zui工具之一。

　　4.2  大川芎方色譜-質譜聯(lián)用技術實例［4］  大川芎方由川芎和天麻兩味藥組成，主要成分包括有機酸、生物堿、內酯、揮發(fā)油、苷類、多糖等。為了深入對其化學成分進行研究，還需進行其化學成分的系統(tǒng)分離分析研究。對于大川芎方中大量有效成分（阿魏酸、鹽酸川芎嗪、天麻苷等）還必須采用液相色譜-質譜進行分析。對于大川芎的提取物，采用微柱液相色譜（2.1 mm內徑柱）和大氣壓下電噴霧質譜同時在正負離子模式下進行了掃描分析，得到基峰色譜圖。從質譜圖的分子離子峰和其與醋酸的加合離子峰可以判斷天麻苷峰和阿魏酸峰，進一步用標樣驗證保留時間和質譜圖均十分吻合。

　　5  色譜指紋圖譜［5］

　　中醫(yī)理論指導下的中藥，尤其是復方制劑，任何一種活性成分均不能反映中醫(yī)用藥所體現(xiàn)的整體療效，這是中藥與化學合成藥品質量標準的根本區(qū)別。所以宏觀地綜合分析成為必然的發(fā)展趨勢，綜合分析與整體分析成為分析化學發(fā)展的必然的反映。在尋求綜合評價中藥質量的過程中，值得注意的趨勢是色譜指紋圖（chromatographic fingerprint）的應用。

　　國外植物藥（復方制劑）色譜指紋圖譜的應用：美國FDA允許草藥保健品申報資料可以提供色譜指紋圖鑒別資料［6］。此外，WHO在1996年草藥評價指導原則中也有規(guī)定，如在“Plant preparations”及“Finished product”的章節(jié)中都提到“如果不可能鑒別有效成分，則鑒別1種或幾種特征成分（如色譜指紋圖譜）以保證制劑和產品質量的一致”［7］。歐共體在草藥質量指南的注釋［8］中提到“草藥的質量穩(wěn)定性單靠測定已知的有效成分是不夠的，因為草藥及其制劑是以其整體作為有效物質。因此，應該通過色譜指紋圖譜顯示其所含的各種成分在草藥及其制劑中是穩(wěn)定的，其含量比例能保持恒定。例如歐山楂（花葉）的薄層色譜指紋圖譜所顯示的結果。”

　　中藥色譜指紋圖譜（圖像）的實驗研究難度較大是不言而喻的，涉及的技術問題較多，需要通過更多的實踐和共同努力逐步解決。

　　6  氣相色譜法（GC）［6］

　　GC是一種較為傳統(tǒng)的色譜方法，具有高柱效、高選擇性、高靈敏度、分析速度快、應用廣等優(yōu)點。在中藥研究方面GCzui大的弱點在于其受樣品蒸汽壓的限制，對于揮發(fā)性小的或熱不穩(wěn)定成分需采用衍生化法或裂解法以增加其揮發(fā)性，但也由此增加了操作的復雜性。在中藥研究方面GC主要用于揮發(fā)性成分的研究，如：蒎烯、龍腦、芳樟醇、檸檬烯等，涉及的中藥分屬唇形科、傘形科、姜科、五加科、菊科等，如干姜、淫羊藿、西洋參、砂仁等；GC亦可用于中藥中的其他成分的研究及測定，例如：對獨角蓮、哈士膜卵油的分析。因此，可以看出GC在中藥復方研究中的應用尚有開發(fā)空間。

　　7  薄層層析（TLC）及薄層掃描法（TLCS）［6］

　　薄層層析及薄層掃描法是較早應用于中藥分析的一種色譜法，由于其操作簡便、色譜結果直觀、顯色方式可選性大，兼具分離鑒定雙重功能且所涉及的設備價格較為低廉，故應用廣泛。對于成分復雜不明，或含無揮發(fā)性、低UV吸收成分的中藥，TLC及TLCS有其應用前景。例如對川芎等藥材，應用TLCS可測定銀杏葉制劑中萜類內酯之含量［9］。但TLC和TLCS因其色譜結果易受鋪板、點樣溫濕度影響，有時難以重復；顯色又受顯色的均勻性、靈敏度等因素影響，因此，其測定結果偏差較大。

　　8  超臨界流體萃取-超臨界流體色譜法（SFE-SFC）［6］

　　SFE-SFC具有省時、省力、取樣量少、萃取效率高等優(yōu)點，特別適用于中藥的預處理。而SFC兼有GC、HPLC之優(yōu)點，能分離分析難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定、HPLC難檢測的物質。SFC在中藥分析中的應用已有報道，如：三七及云南白藥中人參二醇、三醇之測定，馬藍、菘藍中靛玉紅之測定［10］。SFE、SFC現(xiàn)已逐漸由單用發(fā)展為聯(lián)用，其在中藥分析中具有一定使用價值。